我们专有的自沉默腺病毒载体为基因治疗先驱提供高滴度、高质量的 AAV。我们设计 TESSA™ 载体来编码您感兴趣的基因或衣壳，以高质量生产 AAV 种子库存。在任何等级或规模的工艺开发和 rAAV 制造之前。

TESSA™ 载体利用腺病毒生命周期，包含两个时间阶段；早和晚。早期阶段提供了高保真、高滴度 AAV 制造所需的所有腺病毒帮助。晚期导致腺病毒污染。我们对腺病毒晚期区域进行了极其严格的调控，该区域完全负责产生腺病毒结构蛋白。使用 TESSA™ 技术，仍然可以实现完整的早期区域表达，为 AAV 生产提供所需的所有帮助，但晚期区域基因表达被关闭，这意味着不会产生腺病毒结构蛋白。与 Ad5 辅助质粒或野生型腺病毒相比，这可在 AAV 生产过程中抑制腺病毒产生 99.99999 -100%，同时提高 rAAV 产量、包装效率和感染性。

稳定整合将 AAV Rep 和 AAV Cap 添加到 TESSA™ 载体中，可以高效、同时递送 AAV r 的所有必需组件

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所有在同一实验中，这种[TESSA + 质粒 vs TESSA + AAV] 比无辅助三重转染要好得多，根据比较结果，这使我们的产量降低了 26-180 倍。

使用 TESSA™ 制造 AAV 分为两个阶段。第一个是生产初始 AAV 种子库存。这可以通过质粒转染来完成，例如使用我们的瞬时 AAV 系统，使用编码 AAV 基因组和目的基因的第二个 TESSA™ 载体（我们称之为 TESSA 2.0 的过程，它比转染提供更有效的递送），或任何替代方法

总体而言，与无辅助系统相比，使用两个 TESSA™ 载体生产 AAV2 可使 AAV 颗粒产量增加约 40 倍。我们还观察到 AAV2 感染率累积增加了 2400 倍以上（六分之一的基因组感染率）TESSA 中的 AAV2 颗粒具有传染性，而基于质粒的转染中只有 1,200 个颗粒具有传染性；参见下面的数据），完整衣壳的百分比从 2-5% 增加到 70%。

在第二阶段，称为 TESSA Pro，该 AAV 种子库存和另一个 TESSA -AAV-Rep-Cap载体可用于共感染HEK293细胞。这会导致 AAV 进一步复制，从而提高最终 AAV 产量。有趣的是，无论您使用两个 TESSA 载体还是三个质粒转染生成的 AAV 种子库，最终的 AAV 产量都是相当的（参见下面的数据）。

TESSA™ 技术完全可扩展，并且显着减少 AAV 制造所需的原材料数量。它非常适合快速、连续生产 GMP 质量的 AAV，减少批次间差异的可能性。最终，TESSA™ 技术将降低商品成本，并提高基因疗法的安全性。

Tet 抑制子(TetR) 结合位点插入主要晚期启动子中，而 TetR 基因本身在晚期区域内编码。这会形成一个负反馈循环，其中腺病毒结构蛋白只能在强力霉素存在的情况下产生。

左：使用两个 TESSA 载体（蓝色）产生 rAAV，与相比，rAAV2 产量提高了 42 倍到助手免费系统（灰色）。右图：使用两个 TESSA 载体（蓝色）产生的 rAAV2 也比 TICD50 使用无辅助系统（灰色）产生的 rAAV2 更具传染性。事实上，与由 TESSA 载体制成的基因组相比，六分之一的 rAAV2 颗粒具有传染性从质粒中编辑至 1:1200（灰色）。

两种病毒输入，一种病毒输出：初始 AAV 种子库可以从正常的 3 质粒瞬时系统、TESSA™ 载体加上基因兴趣 (GOI) 质粒，或两个 TESSA™ 载体（右）。一旦产生了最初的 AAV 种子库，就可以将其收获并与更多的 TESSA™ 载体一起使用，以共同感染细胞并产生更多的 AAV。此步骤可以作为连续生产过程的一部分重复进行。

左：尽管 rAAV 种子库存比无辅助系统（第 5 列，灰色）提供了更高的初始产量（第 3 列，蓝色），但当 rAAV 种子库存习惯于用第二个 TESSA 载体共感染 HEK293 细胞，所得 rAAV2 产量相当（第 1 列和第 2 列，蓝色）。右图：然而，虽然仍高于无辅助细胞生产（灰色），但在第二轮 rAAV2 生产后，传染性 AAV2 产量略低（第 1 列和第 2 列，相对于第 3 列）。

药明康德是一家全球性合同测试、开发和制造组织 (CTDMO)，致力于加速细胞和基因疗法的进展并缩短上市时间。

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